關於1-D SDS PAGE

[一級書記官]

最近一直在練習

但是失敗居多

想請教一下為什麼在跑片時

常會有電壓過低的情況出現

100V(跑一片),300V(跑兩片)時都一樣

常常都只剩30V上下

有什麼方法可以避免嗎

不然樣品都下不去

卡在上邊直接圓形擴散

有分和沒分一樣(淚奔)

希望有神人大大可以解救

以上


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[一級書記官]

※ 引述《***@bbs.ntu.edu.tw (echo)》之銘言：

上下層 buffer 的鹽濃度對不對? 可以提供你配電泳 buffer 的配方嗎?

我的upper Tris是:

6.06g Tris ＋ 0.4g SDS加DDW到100ml，抽氣過濾，保存於4℃冰箱。

lower Tris:

45.425g Tris ＋ 1g SDS加DDW到250ml ，抽氣過濾，保存於4℃冰箱。

Running buffer：

15g tris ＋72g glycine＋5g SDS in 500ml D.D.W.

跑一片SDS-PAGE時取35ml 稀釋到350ml
跑兩片SDS-PAGE時取50ml 稀釋到500ml

以上

都是這樣一直做的

抱歉因為有事所以太晚回



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[並不是西米露~~]

Post by 一級書記官
上下層 buffer 的鹽濃度對不對? 可以提供你配電泳 buffer 的配方嗎?
6.06g Tris ＋ 0.4g SDS加DDW到100ml，抽氣過濾，保存於4℃冰箱。
45.425g Tris ＋ 1g SDS加DDW到250ml ，抽氣過濾，保存於4℃冰箱。
Running buffer：
15g tris ＋72g glycine＋5g SDS in 500ml D.D.W.
跑一片SDS-PAGE時取35ml 稀釋到350ml
跑兩片SDS-PAGE時取50ml 稀釋到500ml
以上
都是這樣一直做的
抱歉因為有事所以太晚回

呃...是跑蛋白質的嗎??

單單只有提供配方好像不太對~~上下膠還要注意它的tris的pH值
一般來說上面的pH值會低一些~~我們是 上:6.8 下:8.8

running buffer應該是沒錯的~~


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[一級書記官]

Post by 並不是西米露~~
呃...是跑蛋白質的嗎??
單單只有提供配方好像不太對~~上下膠還要注意它的tris的pH值
一般來說上面的pH值會低一些~~我們是 上:6.8 下:8.8
running buffer應該是沒錯的~~

一切都如大大所說...

我的配方也是這個pH值(昨天一忙忘記po)

是跑蛋白質的沒錯 XD

那看來配方應該沒錯

是我操作上哪裡出了問題

才會使電壓過低吧

只事實在想不透

懇請大大賜教


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 編 輯  2007/09/13 Thu 09:27:02